人表皮细胞活化肽因子ELISA检测试剂盒操作步骤如下:
步骤一:准备试剂盒
从冰箱中取出尊龙凯时的试剂盒,在室温下放置30分钟以使其回温平衡。
步骤二:配制洗涤液
使用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释至原倍浓度的洗涤液。
步骤三:添加标准品和待测样本
取适量酶标包被板,固定在框架上,设定标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置。 在标准品孔中加入50μL标准品。在待测样本孔中,先加入10μL待测样本,再加入40μL样本稀释液(即样本稀释5倍);空白对照孔不添加任何物质。
步骤四:温育
将酶标板放置于37℃水浴锅或恒温箱中,温育30分钟。
步骤五:洗板处理
弃去液体,使用吸水纸轻拍干,各孔中加入洗涤液并静置1分钟。然后甩去洗涤液,重复该过程4次(也可使用洗板机按照说明书操作)。
步骤六:加入酶标工作液
在每个孔中加入50μL酶标工作液,空白对照孔不加。
步骤七:再次温育
重复步骤四中的操作。
步骤八:再次洗板
执行步骤五中的洗板操作。
步骤九:显色反应
每个孔中先加入50μL显色剂A液,再加入50μL显色剂B液,在37℃避光条件下显色15分钟。
步骤十:终止反应
取出酶标板,在每个孔中加入50μL终止液,反应停止(颜色由蓝色转为黄色)。
步骤十一:测定结果
使用酶标仪在450nm波长下测量各孔的吸光值(OD值),并以空白孔调零。在终止反应后的15分钟内进行测量。
步骤十二:计算样本浓度
根据标准品的浓度与对应的OD值,计算出标准曲线的线性回归方程。接着,利用样本的OD值在回归方程中计算出样本浓度,最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。可以使用各种应用软件进行计算,以提升工作效率,确保结果的可靠性。
操作提示
在加入样品时,依据标准品与待测样品的数量,务必在相应的微孔中迅速准确地加入规定体积的标准品溶液或待测样品,避免交叉污染。加样结束后,轻轻摇动酶标板,确保溶液均匀分布。
保持温育环境
在温育过程中,始终保持恒温箱内的温度与湿度稳定,以确保反应充分进行。
结果判定
使用尊龙凯时的酶标仪在450nm波长下检测各孔的吸光度值。根据标准品的吸光度值绘制标准曲线,并根据待测样品的吸光度值在标准曲线上查找其对应的浓度值。